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扫码进入如沐风科研中医药院知识平台l题目：金福安汤通过β-连环蛋白（CTNNB1）调控巨噬细胞极化与顺铂协同治疗肺癌l杂志：Biomedicine & Pharmacotherapyl影响因子：IF=7.5l发表时间：2023年12月研究背景肺癌仍然是50岁及以上人群中与恶性肿瘤相关的主要死亡原因。在其各种亚型中，肺腺癌（LUAD）在非小细胞肺癌（NSCLC）类别中较为常见。虽然铂类化疗是NSCLC肿瘤的主要治疗方法，但它通常会诱导耐药并带来严重的毒性问题。因此，迫切需要新的有针对性的替代策略或方法，以最大限度地减少毒性副作用和对抗耐药性。传统中医药（TCM）已成为预防和管理慢性疾病的关键干预措施，金复安汤（JFAD）已被证明对脾虚痰湿的晚期非小细胞肺癌患者非常有效。因此，结合现代科研方法，对JFAD的深入研究可能揭示其在肺癌治疗中的潜在作用机制，为未来的肺癌治疗策略提供新的思路和方向。主要结果1. CTNNB1的表达及与免疫浸润的关系TIMER和Kaplan-Meier数据库的使用揭示了CTNNB1在各种类型的癌症中上调，包括肺癌、结肠癌、食管癌、肝癌、直肠癌、头颈癌等。利用TISCH数据库，可视化CTNNB1在NSCLC患者的各种细胞类型中的表达，结果表明，CTNNB1的表达主要存在于单核巨噬细胞和恶性细胞中，CTNNBl的表达在巨噬细胞中比在肿瘤细胞中略高，CTNNB1在所选数据集的不同细胞类型中的表达也证实了此结果。分析揭示了CTNNB1的存在，M2巨噬细胞浸润增加和M2巨噬细胞基因标记物MRC1表达升高之间的相关性。图1 CTNNB1的表达及与免疫浸润的关系2. CTNNB1在LUAD中的预后价值利用CIBERSORT算法，对III期与I期的LUAD患者进行比较，发现CD8+细胞表达减少，M2细胞表达增加。在比较CTNNB1基因高表达组和低表达组时，观察到CTNNB1高表达组的M2巨噬细胞浸润增加。此外，CTNNB1作为风险因素与CD8+ T细胞浸润之间存在明显的相关性，揭示了CTNNB1表达增加与CD8+ T细胞浸润之间的不利关系。生存分析显示，在CD8+T细胞浸润不足的情况下，较高的CTNNB1水平与NSCLC（LUAD）较差的总生存率之间存在显著联系。图2 CTNNB1在LUAD中的预后价值3. 网络药理学从JFAD中筛选出了53种独特的化合物，发现它们与263种靶蛋白有关联。为了确定与NSCLC相关的潜在靶点，在GeneCards、OMIM、DisGenet、Drugbank数据库进行搜索共获得6324个NSCLC相关基因。这些目标基因的名称在UniProt中进行了标准化，使用Venny 2.1与263种药物靶点取交集得到192个常见的药物疾病靶点。利用已确定的192个常见药物-疾病靶点，通过STRING构建了PPI网络，并对其进行GO/KEGG功能富集分析。图3 网络药理学4. JFAD在体外调节巨噬细胞极化、抑制入侵和抗血管生成流式细胞术分析发现，JFAD组有24.53±3.09%的M1巨噬细胞和16.13±2.05%的M2巨噬细胞，含JFAD药物治疗减少了M2巨噬细胞的表达，增加了M1巨噬细胞的表达。采用Transwell试验评估三组细胞的迁移性和侵袭性，发现与含JFAD血清组相比，空白血清组有更多的LLC细胞迁移穿过基底膜。这表明，含JFAD的血清有可能减轻LLC细胞的侵袭属性，从而暗示了它在控制肿瘤侵袭性方面的治疗潜力。为了研究JFAD对血管生成的影响，在血管内皮细胞进行实验。研究结果表明，JFAD阻碍了血管的形成。这意味着JFAD有效抑制TME内的血管生成。图4 JFAD体外检测5. JFAD联合CDDP在皮下移植肿瘤模型中的协同作用为了探讨JFAD与CDDP联合治疗的潜在协同效应，构建LLC皮下肿瘤模型。接种肿瘤后，未治疗组表现出显着快速的肿瘤生长速率，JFAD和CDDP的联合治疗显示出有效的抗肿瘤活性，超过了单独使用CDDP的单一治疗效果。接种后第25天，JFAD+CDDP组的存活率为80%，而CDDP组为40%，未治疗组只有一只存活的小鼠。蛋白质印迹分析显示，与其他两组相比，JFAD+CDDP组中iNOS表达（M1型巨噬细胞的标志物）显着上调，M2巨噬细胞标志物CD206的表达较低。此外发现，与对照组相比，JFAD+CDDP组的β-catenin蛋白和基因表达均有所下降，然而仅用CDDP处理的组与对照组之间的β-catenin表达没有明显变化。这些发现为JFAD和CDDP联合疗法在皮下移植肿瘤模型中的协同作用提供了有力的证据。图5 在LLC皮下移植肿瘤模型中，JFAD增强了CDDP的抗肿瘤活性6.将CDDP与JFAD结合使用可协同控制肿瘤为了模拟人类肺癌的发病条件，将LLC-Luc细胞移植到C57BL/6小鼠的肺中以评估组合的JFAD+CDDP的治疗性能。结果表明，CDDP或CDDP与JFAD联合治疗分别使1/5和3/5的小鼠肿瘤部分消退，联合治疗在观察期内显示100%的存活率，而顺铂组的存活率为80%。肺图像分析显示，JFAD+CDDP治疗导致肺组织中肿瘤病变的数量最少。随后，使用H&E染色对肺组织进行组织学检查发现，JFAD+CDDP治疗的小鼠中的总肿瘤体积与CDDP单一治疗的小鼠相比显著更小，通过免疫组织化学（IHC）染色评估肺肿瘤中β-catenin蛋白和iNOS的表达水平，发现经JFAD+CDDP治疗后，β-catenin表达下降，而经JFAD治疗后，肿瘤内iNOS表达增加。图6 在原位肺癌模型中评估JFAD和CDDP组合的疗效文章小结本研究揭示晚期NSCLC患者表现出M2巨噬细胞比例升高和CD8+T细胞浸润减少，特别是CD8+T细胞减少与β-catenin相关的不良预后有关。JFAD通过调节M2巨噬细胞比例、促进M1巨噬细胞数量增加、增加CD8+T细胞浸润等途径增强CDDP的抗肿瘤作用，其机制可能与下调β-catenin表达有关。传统中医药与现代药理学相结合，为我们揭示了治疗肺癌的新思路。【福利时刻】科研服务（点击查看）：、、、、、。1278317307。